做細(xì)胞培養(yǎng)和顯微成像實(shí)驗(yàn)時(shí)，很多人把關(guān)注點(diǎn)放在培養(yǎng)基、細(xì)胞狀態(tài)和顯微鏡參數(shù)上，卻忽略了一個(gè)關(guān)鍵因素——培養(yǎng)器皿底材。實(shí)際上，不同底材會(huì)直接影響細(xì)胞貼壁效果、成像質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性。那么問(wèn)題來(lái)了聚合物Coverlip和玻璃Coverlip到底有什么區(qū)別？哪種更適合活細(xì)胞成像？TIRF、STED等顯微技術(shù)又該如何選擇？本文將帶大家一次看懂。

　　為什么底材會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果？

　　在顯微成像過(guò)程中，光線需要穿過(guò)培養(yǎng)器皿底部進(jìn)入物鏡。如果底材厚度不均勻、折射率不匹配或者存在較高自發(fā)熒光，就容易導(dǎo)致圖像模糊、信號(hào)衰減、光學(xué)像差增加、熒光背景升高。因此，底材選擇不僅影響細(xì)胞培養(yǎng)，還直接決定成像質(zhì)量。

　　常見(jiàn)底材有哪些？

　　目前實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的底材主要包括：

　　① #1.5 ibidi Polymer Coverslip 聚合物蓋玻片

　　② #1.5H ibidi Glass Coverslip 高精度玻璃蓋玻片

　　③ 普通#1.5玻璃蓋玻片 標(biāo)準(zhǔn)玻璃底培養(yǎng)皿

　　④ 標(biāo)準(zhǔn)玻璃載玻片

　　⑤ 普通聚苯乙烯培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿

　　聚合物Coverlip有哪些優(yōu)勢(shì)？

　　對(duì)于絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，#1.5 ibidi Polymer Coverslip 聚合物蓋玻片經(jīng)能夠滿足需求。

　　1. 透光率很高，具有高透光性能，同時(shí)兼容紫外成像應(yīng)用。

　　2.氣體的通透性好，材料具備透氣特性。有助于維持長(zhǎng)期細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定。

　　3. 不易碎，相比玻璃底材料更加柔韌。運(yùn)輸和實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中不容易損壞。

　　4. 適合長(zhǎng)期活細(xì)胞培養(yǎng)，特別適用于活細(xì)胞動(dòng)態(tài)觀察、長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)、高通量篩選實(shí)驗(yàn)。

　　玻璃Coverlip適合哪些實(shí)驗(yàn)？

　　如果實(shí)驗(yàn)涉及顯微成像，那么#1.5H Glass Coverslip 高精度玻璃蓋玻片會(huì)更合適。

　　1. TIRF顯微鏡，全內(nèi)反射熒光顯微鏡（TIRF）要求玻璃底材。玻璃Coverlip是必要選擇。

　　2. 超高分辨顯微鏡，適用于STED、STORM、PALM等超分辨成像技術(shù)。

　　3. 高精度定量分析，其底厚公差控制在，可有效減少光學(xué)誤差。

　　不同顯微鏡兼容性對(duì)比

　　ibidi µ-Slides、µ-Dishes和µ-Plates均提供配有#1.5 ibidi Polymer Coverslip 聚合物蓋玻片或#1.5H Glass Coverslip玻璃蓋玻片底部的產(chǎn)品——這兩種底面均能為明場(chǎng)、相差和共聚焦顯微鏡等標(biāo)準(zhǔn)顯微技術(shù)提供光學(xué)清晰度。經(jīng)過(guò)組織培養(yǎng)處理的ibiTreat聚合物蓋玻片無(wú)需額外涂層即可支持大多數(shù)細(xì)胞類(lèi)型的生長(zhǎng)，并簡(jiǎn)化了細(xì)胞顯微鏡的使用。

　　而普通聚苯乙烯培養(yǎng)皿則不推薦用于共聚焦、TIRF、FLIM、FRET、超分辨顯微鏡等成像實(shí)驗(yàn)。

　　為什么不推薦普通培養(yǎng)皿做成像實(shí)驗(yàn)？

　　很多實(shí)驗(yàn)室仍然習(xí)慣使用普通培養(yǎng)板進(jìn)行熒光實(shí)驗(yàn)。但實(shí)際上存在明顯限制。自發(fā)熒光高，很容易干擾熒光信號(hào)。雙折射嚴(yán)重，不適合DIC等偏振相關(guān)顯微技術(shù)。厚度過(guò)大，厚度無(wú)法滿足高分辨率物鏡校正需求。因此僅適用于普通細(xì)胞觀察、常規(guī)培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。

　　實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景如何選擇？

　　#1.5 ibidi Polymer Coverslip 聚合物蓋玻片推薦在常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)、活細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間觀察、共聚焦顯微成像等實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。

　　 #1.5H ibidi Glass Coverslip 高精度玻璃蓋玻片推薦在共聚焦顯微成像、TIRF顯微鏡實(shí)驗(yàn)、STED/STORM/PALM等實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用。

　　對(duì)于絕大多數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)與常規(guī)顯微成像實(shí)驗(yàn)，#1.5 ibidi Polymer Coverslip聚合物蓋玻片憑借良好的透光性、透氣性以及不易碎裂等優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)能夠滿足實(shí)驗(yàn)需求。而對(duì)于TIRF、STED、PALM、STORM等對(duì)光學(xué)性能要求較高的實(shí)驗(yàn)，則建議選擇#1.5H ibidi Glass Coverslip高精度玻璃蓋玻片，以獲得更穩(wěn)定、更精準(zhǔn)的成像結(jié)果。

　　選擇合適的底材，不僅能夠提升實(shí)驗(yàn)效率，更能避免因?yàn)槌上褓|(zhì)量問(wèn)題導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏差。